1.無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應(yīng)達到10000級，室內(nèi)溫度保持在18-24℃，濕度保持在45-65%。超凈臺潔凈度應(yīng)達到100級。

2.無菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。

3.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。

4.無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如5%的甲酚溶液，75%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液，等等。

5.無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。

6.需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。

7.工作人員進入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換專用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進入無菌室進行操作。

8.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時打開超凈臺進行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。

9.供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用75%的酒精棉球消毒外表面。

10.每次操作過程中，均應(yīng)做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。

11.吸取菌液時，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

12.接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。

13.帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒，24小時后取出沖洗。

14.凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水龍頭下沖洗，嚴(yán)禁污染下水道。

參照《藥品衛(wèi)生檢驗方法》 《中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》中 (無菌檢查法)章節(jié) 中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) YY/T0188.6-1995《藥品檢驗操作規(guī)程》

五、無菌室的使用與管理

1 . 無菌室應(yīng)保持清潔整齊，室內(nèi)僅存放必須的檢驗用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、玻璃鉛筆等。&不要放與檢測無關(guān)的物品

2 .室內(nèi)檢驗用具及凳桌等保持固定位置，不隨便移動。

3 .每2-3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作臺、門、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣，*后用紫外燈殺菌半小時。

4 . 定期檢查室內(nèi)空氣無菌狀況，細(xì)菌數(shù)應(yīng)控制在10個以下，發(fā)現(xiàn)不符合要求時，應(yīng)立即徹底消毒滅菌。/無菌室無菌程度的測定方法:取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養(yǎng)基平板各3個(平板直徑均9厘米)，置無菌室各工作位置上，開蓋曝露半小時，然后倒置進行培養(yǎng)，測細(xì)菌總數(shù)應(yīng)置37℃溫箱培養(yǎng)48小時;測霉菌數(shù)則應(yīng)置27℃溫箱培養(yǎng)5天。細(xì)菌`霉菌總數(shù)均不得超過10個為 。

5 . 無菌室殺菌前，應(yīng)將所有物品置于操作之部位(待檢物例外)，然后打開紫外燈殺菌30分鐘，時間一到，關(guān)閉紫外燈待用

6 . 進入無菌室前，必須于緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。

7 .操作應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)定進行，操作中少說話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無菌狀態(tài)。

六、器材及場所的滅菌消毒

微生物檢驗用器材及場所必須進行滅菌或消毒處理，不同的對象采用不同的處理方法

1. 高壓蒸汽滅菌: 工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內(nèi)，一般采用121℃滅菌半小時,當(dāng)然不同的培養(yǎng)基有不同的要求,應(yīng)分別處理

2. 火焰滅菌:接種針、接種環(huán)等可直接火焰滅菌

3. 高溫干燥滅菌: 各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃滅菌2小時

4. 一 般消毒: 無菌室內(nèi)的凳、工作臺、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進行滅菌，必須用其他方法進行消毒處理，采用2%石炭酸或來蘇兒水溶液擦拭消毒，工作人員的手也用此法進行消毒

5. 空氣的消毒: 開啟紫外燈照射30-60分鐘 即可。

七、 操作要領(lǐng)  準(zhǔn)備工作

1. 先進行無菌室空間的消毒，開啟紫外燈30-60分鐘

2. 檢驗用的有關(guān)器材， 搬入無菌室前必須分別進會滅菌消毒

3. 操作人員必須將手清洗消毒，穿戴好無菌工作衣、帽和鞋，才能進入無菌室

4. 進入無菌室后再一次消毒手部，然后才進行檢驗操作
 

八、操作過程注意事項

1. 動作要輕，不能太快，以免攪動空氣增加污染;玻璃器皿也應(yīng)輕取輕放，以免破損污染環(huán)境

2. 操作應(yīng)在近火焰區(qū)進行。

3. 接種環(huán)、接種針等金屬器材使用前后均需灼燒，灼燒時先通過內(nèi)焰，使殘物烘干后再灼燒滅菌

4. 使用吸管時，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必須用洗耳球操作。

5. 觀察平板時不好 開蓋，如欲沾取菌落檢查時，必需靠近火焰區(qū)操作，平皿蓋也不能 大開，而是上下蓋適當(dāng)開縫。

6. 進行可疑致病菌涂片染色時，應(yīng)使用夾子夾持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用過的玻片也應(yīng)置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗滌。

7. 工作結(jié)束，收拾好工作臺上的樣品及器材，***后用消毒液擦拭工作臺。

隨著社會科技發(fā)展，國家越來越重視食品安全問題，無菌室空氣凈化工程也在不斷的普及。有了無菌室凈化工程，將超凈工作臺放置于無菌室內(nèi)操作，使實驗環(huán)境更加潔凈，實驗樣品不易于被污染。

無菌室內(nèi)配置了百級超凈工作臺也并不是所有細(xì)菌都可以進行實驗的，一般常規(guī)的菌落總數(shù)、微生物培養(yǎng)、血細(xì)胞培養(yǎng)、研究、干細(xì)胞研究、大腸菌等實驗可以在百級超凈臺進行。但是如果需要做致病細(xì)菌，為了達到保護實驗室人員的安全問題，就必須得建造生物安全實驗室，使用生物安全柜進行實驗。該類實驗不能在普通的無菌實驗室中進行。

在無菌室的設(shè)計中，通過向室內(nèi)輸送定量的潔凈空氣，稀釋置換室內(nèi)已使用過的潔凈空氣，將臟空氣排出室外，使室內(nèi)的空氣潔凈度等級達到100000級、10000級或局部達到100級的空氣潔凈度要求，室內(nèi)已使用過的臟空氣由清潔的空氣取代，在空氣的稀釋置換設(shè)計中，臟空氣與清潔空氣持續(xù)地混合稀釋，逐漸減少房間中的微粒負(fù)荷。置換稀釋設(shè)計對潔凈區(qū)域的空氣凈化系統(tǒng)的設(shè)計有很高的要求，而且必須考慮無菌室的布局和操作方式，還要為關(guān)鍵區(qū)間提供合適的局部單向空氣流動保護，需要注意與空氣凈化系統(tǒng)供應(yīng)的空氣一樣，滿布高效空氣過濾器的單向流動罩產(chǎn)生的空氣流動也可以置換稀釋房間中空氣傳播的微粒，這種空氣流動會增加有效的房間空氣交換率，并有助于污染空氣置換稀釋。無菌室內(nèi)空氣置換稀釋污染系統(tǒng)設(shè)計時應(yīng)注意:潔凈空氣供應(yīng)的體積應(yīng)足以抵消空間中不斷產(chǎn)生的微粒數(shù)，以此維持工藝操作的基本條件要求;室內(nèi)空間供應(yīng)的空氣應(yīng)比普通維持條件下空氣更清潔;要求混合供應(yīng)的清潔空氣應(yīng)滿足去除房間內(nèi)含有微粒的空氣，以達到室內(nèi)空氣置換稀釋的作用。

無菌室內(nèi)天花板應(yīng)與風(fēng)管、管道、燈具、風(fēng)口等的安裝脫開，光滑、無裂縫，易于清洗。無菌室的門窗材料應(yīng)選擇耐受性好、自然變形小、制造誤差小、容易控制縫隙、氣密性好的材料，***好采用雙層中空玻璃結(jié)構(gòu)的雙層窗，既節(jié)約空間、又節(jié)約能源，還可以避免玻璃窗結(jié)露引起霉變，造成污染;窗盡量采用大玻璃，這樣可減少積灰點，又有利于清潔工作。