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PCR防污染實驗室整體裝修設計

  PCR技術是通過對基因的選擇性片段進行體外高效擴增，實現(xiàn)目的基因的檢測。熒光探針定量PCR（FQ-PCR）是一種新的基因定量檢測技術，是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針，巧妙地把核酸擴增（PCR）與光譜技術結合在一起，從而實現(xiàn)了對目的基因的準確定量檢測，正發(fā)展成為臨床實驗診斷的常規(guī)技術。 防污染是PCR實驗室設計、建造、管理的重點。

  PCR實驗室污染的原因主要來自于幾方面：標本間交叉污染、PCR試劑的污染、PCR擴增產(chǎn)物的污染等、氣溶膠污染等。

  防污染措施主要包括：

  一、科學合理的實驗室設計。將試劑準備、樣品制備、擴增、產(chǎn)物分析進行分區(qū)，特別注意樣品制備及產(chǎn)物分析與其它區(qū)嚴格分離，并設置緩沖區(qū)，通過氣流自動控制，確保實驗室空氣流向試劑準備→樣品制備→擴增→產(chǎn)物分析區(qū)。其工作服、實驗用品及吸樣槍應專用，實驗前用紫外線消毒以破壞殘留的DNA或RNA。

  二、吸樣槍。吸樣槍污染是一個值得注意的問題，由于操作時不慎將樣品或模板核酸吸入槍內或粘上槍頭是一個嚴重的污染源，因而加樣或吸取模板核酸時要十分小心，吸樣要慢，吸樣時盡量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或產(chǎn)生氣溶膠污染。

  三、預混和分裝PcR試劑。所有的PCR試劑都應小量分裝，如有可能，PCR反應液應預先配制好，然后小量分裝并-20℃保存，以減少重復加樣次數(shù),避免污染機會。另外，PCR試劑、PCR反應液應與樣品及PCR產(chǎn)物分開保存，不應放于同一冰盒或同一冰箱。

 四、防止操作人員污染。使用一次性手套、吸頭、小離心管應一次性使用。

  五、設立適當?shù)年栃詫φ蘸完幮詫φ�。陽性對照以能出現(xiàn)擴增條帶的較低量的標準病原體核酸為宜，并注意交叉污染的可能性，每次反應都應有一管不加模板的試劑對照及相應不含有被擴增核酸的樣品作陰性對照。

  六、選擇質量好的 Eppendorf管，以避免樣本外溢及外來核酸的進入，打開離心管前應先離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部，開管動作要輕,以防管內液體濺出。